（一）原理及適用範圍

將乳糖膽鹽選擇性培養基和（hé）TTC顯色劑加載在紙片上，經培（péi）養後能夠在（zài）紙（zhǐ）片上生長（zhǎng）並發酵乳糖（táng）產酸（suān）的即為大腸菌群陽性，記錄每個稀釋度大腸菌群陽性紙片數，根據大腸菌群MPN表（biǎo）查出（chū）相應的大腸菌群數。食品大腸菌群檢驗紙片法與國標法（fǎ）中的九管（guǎn）法相對應，將原來幾步的試驗簡化為一步，時間由78h縮短為24h以內，省去了製備培養（yǎng）基、消和培養器皿的清（qīng）洗處理等大量輔助性工作（zuò），隨時可以打開包裝進行抽樣檢測。執行標準：食品安全國家標準食品微生物檢驗大腸菌（jun1）群（qún）計（jì）數MPN計數法（GB 4789.3）。

適用於各類食品、飲料等樣品（pǐn）中大腸菌群的快速測定。

（二）操作方法（fǎ）

樣品處理（lǐ）：

按無菌操作稱取樣品25g（或25mL）放入含有225mL滅菌磷酸緩（huǎn）衝液稀釋液（或生理鹽（yán）水）的（de）取樣瓶或均質杯中，經充分振搖做成（chéng）1：10的樣品勻液。樣品勻液的pH值應在6.5～7.5之間，必要時用1mol/L氫氧化鈉（nà）或1mol/L鹽酸調節。用1mL滅菌吸管吸取1：10樣品勻液，注入含有9mL稀釋液的試管內，振搖試管（guǎn）製成1：100的樣品勻液。根據對樣品汙染（rǎn）狀況的估計，按上述操作，一次製成10倍遞增係（xì）列稀釋樣品勻（yún）液。每（měi）遞增稀釋1次，換（huàn）一（yī）支1mL無（wú）菌吸管（guǎn）或（huò）吸頭。從製備樣品勻液至樣品接種（zhǒng）完畢（bì），全（quán）過（guò）程不得超過15min。

接種：

選取兩個稀釋度（dù）進行接種，普通食品一般采（cǎi）用1：10和1：100這（zhè）兩個稀釋（shì）度（dù），飲料采用原液和1：10兩個稀釋度。本（běn）品每份由三片大紙片（接10mL，袋中二片疊放算作一大片），六片小紙片（piàn）（接1mL）組成。

用滅（miè）菌吸管吸取10mL 1：10樣品勻液加（jiā）到（dào）含有大紙（zhǐ）片的塑料袋（dài）中（相當於接樣品1g），吸透後平放，做（zuò）三個重複。再用1mL滅菌（jun1）吸管吸取1mL同一稀釋度的樣品勻液加（jiā）到含有小紙片的塑料袋中（相當於（yú）接樣品0.1g），做三個重複。再另取一支1mL滅菌（jun1）吸管（guǎn）吸取1mL 1：100樣品勻液加到含有小紙片的塑料袋中（相當於接樣品0.01g），做三個重複。

培養：

將接種好的紙片（可疊放）放入36℃±1℃培養箱中培養15～24h。

（三）大腸菌群非常可能數（MPN）的報告。

若紙片變黃或（huò）在黃色背景上呈現（xiàn）紅色斑點為大腸菌群（qún）陽性紙片。紙片（piàn）保持（chí）紫藍色不變或在紫藍色背景上呈現紅色斑點，但周（zhōu）圍（wéi）沒（méi）有黃色均為（wéi）大腸菌群陰性紙片。

記錄每個稀釋度大腸菌群陽性紙片數，根據《食品飲料大腸菌群MPN表》查（chá）出相應的大腸菌（jun1）群數。

如接種的（de）第一個梯度為原液，應將表上查出的結果（guǒ）除以10。

（四）注意事項

新的國家標準所用的單（dān）位（wèi）改為每克（kè）（或毫（háo）升）檢樣（yàng）中大（dà）腸菌群非常可能數，標準的接種量為0.333g（mL），MPN表也是由此而設計（jì）。而使用（yòng）本品的標準接種量為3.33g（mL），大紙片接種10mL 1：10樣品勻液相當（dāng）於1g樣品，因而表內數字應相應降低10倍。飲料樣品（pǐn）的接種量（liàng）為33.3mL，大紙（zhǐ）片接種10mL樣品（pǐn）原液，表內數字應降低100倍。

（五）保存條件

本產品需存放在（zài）4℃～10℃冰箱中，保質期為一年，鋁箔袋打開後,未用完的紙片要放（fàng）回（huí）鋁（lǚ）箔袋中封好（hǎo），放到冰箱中，一個月（yuè）內（nèi）用完。在高濕度的環境中可能出現冷凝水，非常好在（zài）拆封前將（jiāng）整包回溫至室溫。