1 適用範圍：

可用於各類食品及原料中菌落總數的測定。也可（kě）用於與食（shí）品接觸的容器、操作台和其他設備表（biǎo）麵的衛生檢測。

2 方法原理：

將營養培養基、凝膠和氯化三苯基四氮唑（TTC）顯色劑等加載在試紙片，經加樣、培養後，細菌菌落在測試片上顯現出紅色菌斑（bān），通過計（jì）數報告結果。

3 操作方法

（1）樣品處理：無菌稱取樣品25g（或25mL）放入含有225mL無菌（jun1）生理鹽水的采樣瓶或均（jun1）質杯內，經充分振搖（均質）做成1:10的稀釋液。用1mL滅菌吸管吸（xī）取（qǔ）1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅（miè）菌生理鹽水的試管內，用1mL滅菌吸管反複吸吹製成1:100的稀釋液。以（yǐ）此類推，做出1:1000等稀釋度的稀釋液，每個稀釋度更（gèng）換一支滅菌吸（xī）管。

（2）接種：一般食品選2～3個稀（xī）釋度進行檢測，含菌量少的液（yè）體（tǐ）樣品（如食用純水和礦泉水等）可直接用原液檢測。將測試片放在水平（píng）台麵（miàn）上，揭（jiē）開上麵的透明薄膜，用滅菌吸管吸取樣品原液或稀釋液1mL，均勻加到中央（yāng）的（de）紙片上，輕輕將上蓋膜放下，靜置5 min使培養基凝固，非常後用手輕輕地（dì）壓（yā）一下。每（měi）個稀釋度（dù）接種兩（liǎng）片。

（3）培養：將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明麵（miàn）朝上水平置於（yú）恒溫培養箱內，堆疊片數不超過12片。培養溫度為36℃±1℃，培養15～24h。

4 結（jié）果判斷與（yǔ）計數：

（1）細菌在紙片上生長後（hòu）會顯（xiǎn）示紅色斑點，選擇菌落數適中（10個～100個）的紙片進行計數，乘以稀（xī）釋倍數（shù）後即為每克（或毫升）樣（yàng）品中（zhōng）所含的細（xì）菌菌落總數。菌落（luò）數在100以內時，按實有數報告。大於100時，用二位有效數字，二位有效數字後麵的（de）數字，以（yǐ）四舍五入（rù）方法計算，並以10的指數來表示。

（2）計數原（yuán）則與報告方式

   ①通（tōng）常選擇菌落在（zài）10個（gè）～100個之間的紙（zhǐ）片進行計數，乘以稀釋倍數報告之（見下表中例次1）。國家標準菌落總（zǒng）數報告方（fāng）式術語為cfu/g或mL，cfu的含義為菌落形成單位。

   ②若有兩個稀釋度的菌（jun1）落數在10個～100個之內，兩者的比（bǐ）值小於2，則取其（qí）平均（jun1）數，若大於2，則采用稀釋度（dù）小者報告（見下表中例次2和例次（cì）3）。

③若三個稀釋度的菌落數都有在10個～100個（gè）之內時，應選擇（zé）二個低數值的平均數（見下（xià）表中例次4）

④若三個稀釋度的菌落數均小（xiǎo）於10個或大於100個時，應重新試用更低或（huò）更高（gāo）的（de）稀釋度進行菌落（luò）計數；或采用均小於數量標準（zhǔn）的非常小值，或采用均大於數量標準的非常大值（見下（xià）表中例次5和例次6）。

5 表麵取樣方法（fǎ）：

加1mL滅菌生（shēng）理鹽水在測試片上，靜置至少1h使培養基凝（níng）固；提（tí）起（qǐ）上層膜，使中央濾紙部分貼到待測物表麵，用手在外側（cè）輕壓（yā）；然（rán）後將上蓋膜合上，置培養箱（xiāng）內培（péi）養。

6 注意事項：

使（shǐ）用過的紙片（piàn）上帶有活菌，需及（jí）時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理。

菌落數少時的情（qíng）況菌落數多時的情況